臺式低溫高速離心機如何提取與制備蛋白質

臺式低溫高速離心機是實驗室最常見的必備儀器，今天向大家介紹臺式低溫高速離心機如何提取與制備蛋白質。

蛋白質樣品制備

秧苗蛋白質樣品的提取按Davermal等(1986)的方法進行。

100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巰基乙醇)，混勻，-20℃沉淀1小時，4℃，15000r/min離心15min，棄上清，沉淀復溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巰基乙醇)，再于-20℃沉淀1小時，同上離心棄上清，(有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。

按每mg干粉加入20μl(可調)UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸鉀，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫蘇糖醇)，2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc，pH3.5-10)，6%TritonX-100]，37℃溫育30min，期間攪動幾次，28度(溫度低，高濃度的尿素會讓溶液結冰)16000r/min離心15min，離心力越大時間長一點越好！上清即可上樣電泳?；蛘?70度保存。

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植物根中蛋白質的抽取

(1)sample,液氮研磨

(2)裝1.5mlcentrifuge用tube

(3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul

(4)12000rpm,4度,10-15minite

(5)取上層液，蛋白質就在里面